Público alvo
Curso técnico em enfermagem.
Recurso
Recurso concreto que consiste em uma prática de coloração de Gram.
Para desenvolvimento dessa técnica são necessários: uma alça de platina, um bico de Bunsen, isqueiro, quatro lâminas para microscopia, microscópio de luz, óleo de imersão, caneta para marcação de vidro, quatro placas de Petri com quatro culturas bacterianas de diferentes espécies, água, corantes cristal violeta e safranina, lugol e álcool.
Esfregaço e Fixação da lâmina
Inclinar uma alça de platina à 45º sobre chama azul de um bico de Bunsen, aquecendo até que a extremidade da alça fique com uma coloração rubra. Pingue um pouco de água na lâmina de microscopia. Após o esfriamento da alça, encoste-a na cultura bacteriana e transfira para a lâmina, fazendo movimentos cíclicos.
Para fixação do esfregaço, passe a lâmina na chama do bico de Bunsen e deixe esfriar. Faça esse movimento até que a água da lâmina seque e se observe uma coloração esbranquiçada na área onde foi feita o esfregaço.
Protocolo da coloração e observação
Cubra a área do esfregaço na lâmina com o corante cristal violeta e deixe agir por um minuto. Depois lave rapidamente em água corrente e pingue lugol e deixe agir por dois minutos. Após isso lave com água e pingue álcool até que não se note corante escorrendo da lâmina. Novamente lave com água, pingue o corante safranina e deixe agir por trinta segundos. Posteriormente lave com água e seque a lâmina, usando papel no verso da lâmina, onde não tenha a colônia amostrada. Para observação utilize a objetiva de imersão.
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Figura 1. Bactérias gram+ à esquerda em roxo e bactérias gram-
à direita em vermelho
Fonte: homepage.ntlworld.com/diamonddove/04a_Gram/Gram.htm |
A diferenciação das bactérias gram+ e - pode ser observada pela retenção do cristal de violeta pelas gram+ e as gram- pela coloração rósea devido à safranina e pela não retenção do cristal de violeta.
Essa atividade pode ser avaliada com um relatório sobre a prática e importância da diferenciação de bactérias para um diagnóstico rápido e acurado.
Referências Bibliográficas
PELCZAR Jr, J. M.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia: Conceitos e aplicações. Vol. 1, 2ªed., São Paulo: Pearson Makron Books, 1997. 524p.
OKURA, M. H.; RENDE, J. C. Microbiologia: Roteiros de aula prática. 1ªed., Tecmedd, 2008. 201p.